Inula viscosa yapraklarından elde edilen metanol ve su özütlerinin malign melanom hücre hatları üzerine sitotoksik ve antiproliferatif etkilerinin araştırılması

Abstract

Malign melanom (MM) tedavisinde mevcut terapötik yaklaşımların çoğu, meydana gelen mutasyonlar sonucu etkinliğin devamlılığı nedeniyle tümör hücrelerinin aşırı proliferatif özellik sergilemesini sağlayan MAPK yolağındaki etkin kinazların inhibisyonunu hedefler ancak ne yazık ki hastalarda tedavi sonrası ilaçlara karşı direnç oluşmaktadır. Bu nedenle adjuvan olarak geliştirilebilecek yeni bitkisel çözümler araştırmacıların dikkatini çekmektedir. Mevcut tez kapsamında Inula viscosa (IV) yapraklarından elde edilen metanol ve su özütlerinin MM hücre hatlarında (A2058 ve MeWo) ve normal fibroblast hücreleri üzerindeki olası sitotoksik ve antiproliferatif etkilerinin in- vitro değerlendirilmesi hedeflenmiştir. Mevcut tez kapsamında öncelikle IV'nin taksonomik ve kromatografik analizi yapılmış, antioksidan aktivitesi değerlendirilmiştir. Bu analizleri takiben belirlenen süre ve dozlarda IV yapraklarından elde edilen metanol ve su özütlerinin A2058, MeWo ve normal fibroblast hücreleri üzerindeki antiproliferatif etkileri WST-1 analizi ile belirlenmiştir. WST-1 bulgularına göre bir sonraki aşamalara Inula viscosa'nın metanol özütü (IVM) ile devam edilme kararı alınmıştır. IVM'nin apoptotik etkilerinin ve hücre siklusu üzerindeki etkilerinin belirlenmesi için Annexin-V ve hücre siklusu analizleri gerçekleştirilmiştir. Hücrelerde meydana gelen morfolojik değişimler akridin oranj-etidyum bromür (AO/EB) floresan boyaması ile görüntülenmiştir. Son olarak IV'nin metanol özütünün (IVM) hücre hatlarının metastatik yeteneklerini nasıl etkilediğini gözlemlemek için yara iyleşmesi testi uygulanmıştır. Elde edilen bulgulara göre IV'nin metanol özütünün canlılığı sırasıyla en fazla MeWo, A2058 ve normal fibroblast hücre hattında inhibe ettiği tespit edilmiştir. Buna ilaveten IVM'nin MM ve normal fibroblast hücre hatlarında apoptotik ölümü indüklediği belirlenmiştir. Hücrelerin genomik profillerindeki farklılıktan dolayı IVM'nin uygulanan dozun miktarına bağlı hücrelerde oluşturulan DNA hasarının hücre döngüsünün farklı kontrol noktalarında tespit edilebildiği öngörülmüştür. Son olarak IVM'nin içerisinde çözündüğü varsayılan bileşenlerin literatürdeki bulgularına göre hücrelerin metastatik özelliğini çeşitli genleri regüle etmek vasıtasıyla inhibe edebileceği kanısına varılmıştır

Most of the therapeutic approaches that are available in the treatment of malignant melanoma (MM) target the inhibition of active kinases in the MAPK pathway, which allows the tumor cells to exhibit excessive proliferative properties due to the continuity of the activity resulting from mutations, but unfortunately patients develop resistance to drugs after treatment. Therefore, new herbal solutions that can be developed as adjuvants attract the attention of researchers. Within the scope of the present thesis, it was aimed in vitro evaluation of possible cytotoxic and antiproliferative effects of methanol and water extracts from Inula viscosa (IV) leaves on MM cell lines (A2058 and MeWo) and normal fibroblast cells. Firstly, taxonomic and chromatographic analysis of water and methanol extract from IV leaves was performed and antioxidant activity was evaluated. Following these analyzes, the antiproliferative effects of methanol and water extracts obtained from IV leaves on A2058, MeWo and normal fibroblast cells were determined by WST-1, According to WST-1 findings, it was decided to continue the next steps with IVM. Annexin-V and cell cycle analyzes were performed for determination of apoptotic effects and at which check point of cell cycle they are arrested. Morphological changes in cells were visualized by inverted microscopy by fluorescent staining of acridine orange-ethidium bromide. Finally, a wound healing test was performed to observe how the methanol extract of IV affects the metastatic ability of these cell lines. According to the findings, it was found that methanol extract of IV(IVM) inhibits viability of in MeWo more then A2058 and least normal fibroblast cell lines, respectively. In addition, the methanol extract of IV was found to induce apoptotic death in MM and normal fibroblast cell lines. Due to the differences in the genomic profiles of these cell lines, it is predicted that the DNA damage generated in the cells due to the amount of dose of IV administered can be arrested at different check points of the cell cycle. Finally, according to the literature findings it was concluded that the components assumed to be dissolved in IVM may inhibit the metastatic property of these cell lines by regulating various genes according to the literature findings.