Eritrosit süspansiyonlarının depolama sürecinin immünmodülatuvar etkileri

Abstract

Allojeneik kan transfüzyonu sonucunda alıcıda meydana gelen reaksiyonların en önemlilerinden biri transfüzyonla ilişkili immün modülasyondur (TRIM). Kanın depolama süresi, allojeneik lökositler ve daha birçok etkenin TRIM’e neden olduğu düşünülmektedir. Çalışmamızda TRIM gelişimine yönelik yeni bilgiler elde edilmesi amaçlanmaktadır. Çalışmamızda üç adet bağışçıdan alınan tam kanlardan eritrosit süspansiyonları (ES) elde edildi. ES’lerin 0, 7, 14, 21 ve 42. depolama günlerinde torbalardan alınan kan örneklerinden periferik kan mononükleer hücreleri (PKMNH) izole edildi. CD3+,CD4+ ve CD8+T hücrelerin proliferasyon, aktivasyon ve canlılık düzeylerindeki değişimler akım sitometre cihazı yardımıyla değerlendirildi. Ayrıca bir kişiden EDTA’lı tüpe alınan 30 mL kandan PKMNH’leri ve granülositler izole edildi. Kanın depolama sürecinde kullanılan CPD ve SAG-M solüsyonlarının bu hücrelerin canlılığına olan etkisi incelendi. Sonuç olarak 21. günden sonra ES içindeki T hücre canlılığının ilk günlere oranla azaldığı ve 42. güne gelindiğinde ölü T hücre oranının %90'ların üzerine çıktığı belirlendi. 21 ve 42. günlerde CD3 hücre düzeyinin %0,1-%0,2’lere düştüğü görüldü. T hücrelerin poliferasyon yeteneğinin 14. günden sonra en alt seviyeye indiği görüldü. Ayrıca ES’ler elde edildikten sonra 18 saat içinde aktivasyon belirteç (CD25, CD69, CD154) düzeylerinin azalmaya başladığı belirlenmiştir. CPD ve SAG-M solüsyonlarının ayrı ayrı uygulanmasının PKMNH ve granülositlerin canlılığını azalttığı, ancak transfüzyonu simüle eden konsantrasyonlar olan %12 CPD ve %88 SAG-M karışımının canlılığa etkisi olmadığı, sadece PKMNH’lerine 10 µL’lik konsantrasyonda pozitif etki yaptıkları görülmüştür. 21 ve 42. günlerde, depolanan ES’lerin TRIM’e neden olabileceği düşünülmüştür. Ancak daha fazla kişi ve farklı yöntemler kullanılarak alıcıdaki etkilerinin görülebilmesi için ek çalışma yapılması gerekmektedir.

One of the most important reactions that occur in the recipient as a result of allogeneic blood transfusion is transfusion-associated immune modulation (TRIM). The storage time of blood, allogeneic leukocytes and many other factors is thought to cause TRIM. Our study, it is aimed to obtain new information about the development of TRIM. In our study, erythrocyte suspensions (ES) were obtained from whole blood donated by three donors. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated from blood samples taken from bags on storage days 0, 7, 14, 21, and 42 of ESs. Changes in proliferation, activation, and viability of CD3+ , CD4+, and CD8+ T cells were evaluated by flow cytometry. In addition, PBMCs and granulocytes were isolated from 30 mL of blood collected in EDTA tube from one individual. The effect of CPD and SAG-M solutions used in the blood storage process on the viability of these cells was investigated. As a result, it was determined that the T cell viability in ES decreased after the 21st day compared to the first days, and the rate of dead T cells increased above 90% by the 42nd day. It was observed that CD3 cell level decreased to 0,1%-0,2% on the 21st and 42nd days. It was observed that the proliferation ability of T cells decreased to the lowest level after the 14th day. In addition, it was determined that activation marker (CD25, CD69, CD154) levels started to decrease within 18 hours after ESs were obtained. It has been observed that the separate application of CPD and SAG-M solutions reduces the viability of PBMC and granulocytes, but the concentrations simulating the transfusion, 12% CPD and 88% SAG-M mixture, have no effect on viability, and they also has been observed a positive effect on PBMC at a concentration of 10 µL. On days 21 and 42, it was thought that stored ES could cause TRIM. However, additional studies are required to see the effects on the recipient by using more people and different methods.