Aşı adayı yerel BVD virus suşlarında inaktivasyon kinetiğinin belirlenmesi ve deney hayvanlarında immunizasyon çalışmaları

Abstract

Bovine viral diarrhea virus (BVDV) ülkemizde ve dünyada yaygın olarak görülmekle birlikte hastalığa karşı koruma ve kontrol stratejileri geliştirilmektedir. Koruma kontrol programlarında ön plana çıkan önlemlerden biri de aşılama olarak görülmektedir. Tez çalışmasında aşı adayı yerel BVDV suşlarının çoğalma karakterizasyonlarının, inaktivasyon kinetiğinin ve farklı adjuvantlarla hazırlanan inaktif BVDV aşı formülasyonlarının deney hayvanlarındaki serolojik yanıtlarının belirlenmesi amaçlandı. BVDV TR-21, TR-26 ve TR-15 suşlarının optimum MOI değerleri sırasıyla 1, 0,1 ve 0,1 MOI olarak tespit edildi. Ayrıca TR-21, TR-26 ve TR-15 suşlarının çoğalma eğrileri oluşturularak virus ekimini takiben en yüksektitrelere sırasıyla 48., 12., ve 36. saatlerde ulaştığı saptandı. Kimyasal olarak BEI maddesi kullanılarak yapılan inaktivasyon kinetiği çalışmasında TR-21, TR-26 ve TR-15 suşları sırasıyla 16., 10., ve 10. saatte tamamen inaktive olduğu tespit edilmiştir. Yağ bazlı, AlOH3 bazlı ve saponin adjuvantları kullanılarak oluşturulan formülasyonlarla kobay ve farelere immunizasyon işlemi gerçekleştirildi. Aşı sonrası gelişen humoral immun yanıtı belirlemek için in-house ELISA ve nötralizasyon testi uygulanarak verilerin birbirini teyit ettiği gösterildi. AlOH3 bazlı adjuvant gruplarına nazaran yağ bazlı adjuvant gruplarının aşıda etkili şekilde çalıştığı belirlendi. Yağ bazlı adjuvant gruplarında F-3 formülasyonunun 21. ve 51. günlerdeki antikor titreleri yüksek olsa da 81. ve 111. günlerde F-4 grubunun aşağısında kaldığı tespit edilmiştir. Aynı zamanda F-4 grubunda kullanılan adjuvantın yapısı gereği (w/o/w) aşı formülasyonu aşamasında kullanımının daha rahat olması açısından kolaylık sağlayacağı düşünülmektedir. Aşılarda bulunan yerel suşların önemiyle beraber homolog ve heterolog suşlara karşı etkinlikleri ortaya koyulmuştur. İleriki süreçlerde inaktif yerel aşı üretimi için uygulanabilir güncel veriler elde edilmiştir.

Although bovine viral diarrhea virus (BVDV) is common in our country and in the world, protection and control strategies are being developed against the disease. One of the prominent measures in protection control programs is seen as vaccination. In the thesis study, it was aimed to determine the proliferation characteristics, inactivation kinetics of vaccine candidate local BVDV strains and the serological responses of inactive BVDV vaccine formulations prepared with differentadjuvants in experimental animals. Optimum MOI values of BVDV TR-21, TR-26 and TR-15 strains were determined as 1, 0,1 and 0,1, respectively. In addition,growth curves of TR-21, TR-26 and TR-15 strains were created and it was determined that they reached the highest titers at 48, 12, and 36 hours, respectively, after virus cultivation. In the inactivation kinetic study using BEI as a chemical, itwas determined that the TR-21, TR-26 and TR-15 strains were completely inactivated at the 16th, 10th and 10th hours, respectively. Guinea pigs and mice were immunized with formulations using oil-based (ISA 50 and 206), AlOH3-based and saponin adjuvants. In-house ELISA and neutralization test were applied to determine the humoral immune response developed after vaccination, and it was shown that the data confirmed each other. It was determined that oil-based adjuvant groups worked effectively in the vaccine compared to AlOH3-based adjuvant groups. Although the antibody titers of the F-3 formulation on the 21st and 51st days were high in the oil-based adjuvant groups, it was found to be below the F-4 group on the 81st and 111th days. At the same time, due to the nature of the adjuvant used in the F-4 group (w/o/w), it is thought that it will provide convenience in terms of being more comfortable to use in the vaccine formulation stage. The importance of local strains in vaccines and their effectiveness against homologous and heterologousstrains have been demonstrated. Applicable up-to-date data were obtained for the production of inactivated local vaccines in the future.